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技術服務

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腺相關病毒載體服務

源起:
CBT-LS-AAV由臺灣大學生物技術研究中心與生命科學系於2016年協同成立,於 2017 年正式開始接受專案服務。第一任實驗室主持人為生命科學系助理教授陳示國老師。

服務說明:

目前腺相關病毒 (adeno-associated virus, AAV) 為小病毒科之無包膜單股 DNA 病毒,為人類中常見的感染源,但是 AAV 感染對人體並不會造成症狀或疾病。重組腺相關病毒 (rAAV) 只保留外衣殼基因,原致病基因已被轉殖基因所取代,已成為極具潛力的基因轉殖工具。優點為可以於模式生物體內表達,不同血清型可感染特定宿主細胞,不易引起明顯的免疫反應。目前本服務設施提供的rAAV titer 1~2x1011 vg/ml,已可到達國外各知名大學病毒載體服務設施標準(1x1011 vg/ml)。

優勢:
rAAV 為一有效且快速的轉殖基因載體,適合做為探討某一基因的生理功能或基因治療的研究工具。配合近年來發展的 RNA interference、CRISPR/Cas9 及 Optogenetics 技術,rAAV 也可達到類似基因 knock-down、knock-out 和 knock-in 小鼠的效果。但優點是可快速的在 1~2 個月內製備完成,具有時效上的優勢。 另外,應用帶有兩種以上基因的 rAAV,可在小鼠的特定組織或器官內表達多種轉殖基因或剔除多種目標基因,使基因功能研究更具彈性。

配合應用:
(1) 配合 CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9) 技術:利用不同的 Cas9 system 包括 LentiCRISPR v2, SpCas9 和 AAV-Cas9 針對一般細胞株、primary culture、幹細胞或活體小鼠做基因組編輯 (genome editing)。

(2) 配合 Optogenetics 相關蛋白應用:光通道蛋白 (photoreceptor) 是一種受特定波長光源刺激後會打開的離子通道,如 Microbial channel rhodopsin or halorhodopsin,以 rAAV 表現於特定神經細胞上後,利用光調節神經細胞的反應。此系統提供一個可精準控制的研究工具。

(3) 血清型選擇:血清型 (serotype) 是由衣殼的結構蛋白的類型進行分類,並具有組織特異性。其中血清型 2 (rAAV2) 對於神經細胞組織感染率很高,血清型 9 (rAAV9) 有廣泛組織感染性,是目前於研究中廣泛使用的血清型。不同血清型具有不同組織的特異感染性。使用者可依本身實驗的需求選擇適當的血清型,並配合適當的注射方式,即可在特定的器官內大量表現轉殖基因。此服務設施目前提供 rAAV2 與rAAV9 病毒載體。

注意事項:
1.rAAV 生物操作安全等級為 RG1,除特殊轉殖基因需於 BSL2 以上實驗室操作,一般可於 BSL1 生物安全操作櫃進行實驗。為了避免危害操作人員健康及生物安全,請勿表現對人類具有感染性的病原、致癌基因或對人體有危害之 RNA、蛋白質。 客製化專案申請請附上 「基因重組實驗申請同意書」。
2.請確認 transgene cassette (包含 promotor, target gene, etc.) 小於4.7 kb。申請前,使用者請務必確認含目標基因 rAAV 的質體具有表現能力 (in vitro expression)。
3.欲客製化 rAAV者需提供足夠量之 Maxi Preparation pAAV-target gene plasmid,平台可提供適合的 backbone plasmid 供使用者做 cloning。
4.保存方法:
長期保存:rAAV 可長期保存於攝氏 -80 度,建議使用者於第一次解凍時分裝,保存於 -80 度冰箱,使用者需自備乾冰運送。
短期保存:rAAV 可於 -20 度中保存 1~2 週,titer 並不會有顯著改變。

收費標準:
本服務平台宗旨為提供校內研究服務。收費如下:

客製化 rAAV:
(1) 客製化 rAAV 產量測試:因轉殖基因的差異會影響 rAAV 產量,申請前須先進行產量測試,方可大量生產,每次收費 3,000 元。
(2) 校內使用者一單位 20,000 元,校外教學研究使用者一單位 25,000 元。保證產量為 1*1011 vg/mL。製備從測試起至交貨約需 4~6 週,但交貨順序依使用者提申請的先後順序出貨。

常備 rAAV:
平台提供一些可隨時購買的 rAAV,校內使用者一單位(100 uL) 4,000 元,校外教學研究使用者一單位 5,000 元,保證產量為 1*1011 vg/mL。
<常備病毒清單>

付費方式:
本服務以研究專案方式報價、計費。
<專案申請書下載>

聯絡資訊:
詳細樣本製備問題,請聯絡技術員
何映 技士 02-3366-9680 hoying527@ntu.edu.tw



本服務委由生命科學系之腺相關病毒載體服務設施

技術平台協助執行,相關資訊請參考下方連結:


http://www.lifescience.ntu.edu.tw/2016/link.html?s=AAVcore

  

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